體外(wai)培養細(xi)胞(bao)(bao)的(de)(de)增殖(zhi)活(huo)(huo)力(li)受多種因素的(de)(de)影響，如(ru)某些(xie)細(xi)胞(bao)(bao)因子可促進細(xi)胞(bao)(bao)的(de)(de)增殖(zhi)，而一(yi)些(xie)藥(yao)物如(ru)抗(kang)癌藥(yao)物則可抑制(zhi)細(xi)胞(bao)(bao)的(de)(de)生(sheng)長，甚至誘導細(xi)胞(bao)(bao)的(de)(de)死亡(wang)。目前，細(xi)胞(bao)(bao)活(huo)(huo)力(li)檢(jian)測方法中，CCK8法是一(yi)種方便、靈敏、快速、無(wu)放射性、重復(fu)性好檢(jian)測方法。

此(ci)外，CCK8檢測亦可用于(yu)(yu)繪制細胞(bao)的(de)生長曲(qu)(qu)線，一定數量(liang)(liang)的(de)細胞(bao)接種(zhong)后，連續測量(liang)(liang)7天(tian)的(de)吸光(guang)度，然后將7天(tian)測量(liang)(liang)所得的(de)吸光(guang)度值標于(yu)(yu)坐(zuo)標紙(zhi)上(shang)，再(zai)將各(ge)點連成曲(qu)(qu)線，即(ji)可得生長曲(qu)(qu)線。

包(bao)裝清單：

CCK8細胞增殖檢測試劑盒儲存條件：

-20℃保存，二年有效；4℃保存，一年有效

操(cao)作(zuo)說(shuo)明：

1、細胞(bao)活性檢(jian)測

① 在(zai)96孔板(ban)中(zhong)接種適量的細胞懸液(ye)（100ul/孔），在(zai)培養箱中(zhong)培養24小時；

② 向每孔中(zhong)加入10ul CCK-8溶液；

③ 繼續放于培養箱中(zhong)培養1-4小(xiao)時；

④ 用酶標儀測定在450nm的吸光度。

2、細胞增殖-毒性檢測

① 在96孔(kong)板中(zhong)接(jie)種適(shi)量的(de)細(xi)胞懸液(ye)（100ul/孔(kong)），在培養(yang)(yang)箱中(zhong)培養(yang)(yang)24小時；

② 在96孔板中加(jia)入(ru)不同濃(nong)度的生(sheng)長因子、細胞因子或藥物(wu)等；

③ 將96孔板置于培養(yang)箱中培養(yang)適當(dang)的時間(jian)；

④ 向每孔(kong)中加(jia)入10ul CCK-8溶液(ye)；

⑤ 繼續放(fang)于培(pei)養箱中培(pei)養1-4小(xiao)時；

⑥ 用酶標儀測(ce)定(ding)在450nm的吸光度。

注意事項

1、向96孔板(ban)接種細(xi)胞(bao)時(shi)，應前(qian)后、左右搖晃培養板(ban)，使細(xi)胞(bao)在(zai)孔中分布均勻，避免細(xi)胞(bao)堆(dui)集在(zai)孔的(de)中央(yang)生長。

2、CCK-8 的培養(yang)時(shi)間一(yi)般為(wei)(wei) 1-4 小(xiao)時(shi)，但在培養(yang) 30 分鐘左右即可取出肉眼觀(guan)察顯色(se)程(cheng)度，根據(ju)細胞種類而(er)定，需要(yao)摸(mo)索(suo)條件，CCK-8 的最佳反應時(shi)間以具(ju)體顯色(se)的最佳時(shi)間為(wei)(wei)準。

3、加入CCK8溶液時避免氣泡的產生(sheng)，從而影響吸光度。

酶標儀(yi)讀取吸光(guang)度時可(ke)使用430-490nm之間的濾(lv)光(guang)片，但450nm 濾(lv)光(guang)片的檢測(ce)靈敏度最高。

4、CCK8的(de)檢測依賴于脫氫酶催化的(de)反應(ying)，所以還原劑（例如(ru)一些(xie)抗氧(yang)化劑）會(hui)干(gan)擾檢測，如(ru)干(gan)預因素(su)具有還原性，應(ying)在(zai)檢測前通過換液(ye)的(de)方法予(yu)以去除。

5、培養(yang)基中酚紅(hong)對(dui)吸光度的(de)影(ying)響(xiang)，可以(yi)通過扣除空(kong)白孔中本(ben)底的(de)吸光度而消除，因(yin)此，不會(hui)對(dui)檢測(ce)結果造成影(ying)響(xiang)。

6、所測吸(xi)光(guang)度(du)值范(fan)圍應在0.4-2之間，此范(fan)圍內的(de)吸(xi)光(guang)度(du)值與細胞的(de)數(shu)(shu)量與活(huo)力之間的(de)線(xian)性關系較為明顯，如果超出此范(fan)圍，應相(xiang)應增加或減少(shao)接(jie)種細胞的(de)數(shu)(shu)量。

備注(zhu)：

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